Микробиологическая диагностика
Исследуют кожные и ногтевые чешуйки, отделяемое язвенных поражений слизистых оболочек, гной, спинно-мозговую жидкость, кровь, желчь, испражнения, мочу, кусочки биопсийной ткани и трупные материалы.
Микроскопию проводят в неокрашенном состоянии в 10 % едкой щелочи, смеси спирта и глицерина (соотношение глицерин : спирт : вода - 2:2:4) или растворе Люголя (кристаллического йода - 1 г, йодистого калия - 2 г, воды - 150 мл). Положительный ответ выдается при обнаружении псевдомицелия или цепочек из круглых и удлиненных дрожжевых почкующихся клеток.
Препараты, фиксированные прогреванием или смесью Никифорова, окрашивают по Граму (они грамположительные), Цилю - Нильсену (они синего цвета с розово-желтоватыми мелкозернистыми включениями липоидов), и Романовскому - Гимзе (они розовато-фиолетовые, хроматиновое вещество красное, волютин темно-фиолетовый).
Обнаружение дрожжеподобных грибов при микроскопическом исследовании патологического материала из открытых очагов поражения имеет диагностическое значение только при подтверждении получения культур серологическими и аллергическими методами исследования и посредством специфической реакции иммунолюминесценции. Обнаружение Candida в закрытых очагах поражения - в спинно-мозговой жидкости и желчи, асептично взятой моче, а также в гистологических срезах из гранулематозных очагов поражения в различных тканях и органах является ценным для установления кандидозной природы заболеваний. Все жидкие прозрачные экскреты (мочу, желудочный сок, спинно-мозговую жидкость и пр.) перед исследованием центрифугируют, 2-3 капли осадка помещают на предметное стекло, покрывают покровным и микроскопируют.
Для получения культур дрожжеподобных грибов широко применяют плотные и жидкие сахарные среды. Во избежание бактериального загрязнения рекомендуется предварительно обработать посевной материал серной или соляной (7%) кислотой, а также посевы на среды с антибиотиками: пенициллином или биомицином в количестве 50-100 ЕД на 1 мл питательной среды.
Посевы выдерживают при температуре 30-35°С в термостате в течение 15 дней.
В положительных случаях, обычно на 2-3-й день видны сначала мелкие блестящие куполообразные колонии дрожжеподобных грибов, а затем мощные, нередко сливающиеся колонии с отпрысками в субстрат.
Вирулентность дрожжеподобных грибов определяют на кроликах весом 1,8-2,2 кг, которым внутривенно вводят 500 тыс. клеток чистой культуры дрожжеподобного гриба в 1 мл физиологического раствора. Через 9 суток кроликов забивают и по данным патологических изменений судят о степени патогенности штаммов. Невирулентные штаммы не вызывают изменений в почках кролика, забитого на 9-й день после заражения. Маловирулентные обусловливают образование в почках узелков и микроабсцессов. Вирулентные штаммы вызывают гибель кролика до 9-го дня при специфических изменениях в почках (обширные множественные высыпания серовато-беловатых узелков и микроабсцессов в корковом слое почек).
Серологическую диагностику кандидозов проводят с использованием серологических реакций (РСК, агглютинации, преципитации, гемагглютинации, преципитации в геле и др.). Используют также иммунофлюоресценцию.
Для подтверждения кандидозной природы болезни используют нарастание титров динамику агглютининов в процессе болезни (диагностически значимые титры 1 :160-1 : 2560).