Количественное определение спектометрией в ультрафиолетовом спектре
Спектрофотометрия в ультрафиолетовой области широко используется для количественного определения лекарственных веществ и их препаратов и включена во все современные фармакопеи.
Идеальное вещество для таких измерений должно иметь четко выраженную полосу поглощения с широким максимумом (для уменьшения ошибки за счет ширины щели) и со значительной величиной поглощения при максимуме.
Чувствительность анализа определяется в основном способностью вещества поглощать свет и выражается, как было указано выше, молярным коэффициентом поглощения. Предельные концентрации веществ, анализируемые при помощи спектрофотометрии, как правило, меньше, чем при обычных и потенциометрических титрованиях или весовых измерениях, что и объясняет тот факт, что спектрофотометрия используется при определении небольших количеств веществ.
Основным условием для количественного анализа является соблюдение закона Ламберта - Бера в пределах указанных концентраций. Для проверки соответствия закону строят график зависимости: поглощение - длина волны, если все точки лежат на прямой - закон выполняется. Точность метода будет зависеть от наклона прямой: чем больше наклон, тем выше точность.
По другому способу рассчитывают фактор для каждого стандартного раствора и определяют область концентраций, в пределах которой величина D/С остается постоянной.
Известны два принципиально различных способа спект- рофотометрических количественных определений. По одному из них содержание вещества рассчитывают на основании предварительно вычисленной величины поглощения. Чаще всего в таких .случаях используется значение Е (1%, 1 см) и закон Ламберта - Бера принимает следующую форму:
Британская фармакопея 1968 г. приняла этот метод определения как для лекарственных веществ, так и для лекарственных форм.
Растворяют около 10 мг (точная навеска) в безводном спирте и доводят спиртом до 100 мл, разводят 5 мл полученного раствора до 50 мл безводным спиртом и измеряют поглощение полученного раствора в кювете с толщиной слоя 1 см при 240 им Е (1%, 1 см) для С20Н30О2 при максимуме около 240 нм - 535 (Метилтестостерэн).
Государственная фармакопея СССР X издания следующим образом рекомендует определять кортизона ацетат в таблетках.
Около 0,1 г (точная навеска) порошка растертых таблеток помещают в мерную колбу емкостью 100 мл с притертой пробкой, прибавляют 60-70 мл 95% спирта и растворяют при легком подогревании на водяной бане прн помешивании в течение 10-15 минут. По охлаждении раствор доводят до метки 95% спиртом, хорошо перемешивают и дают отстояться в течение часа. Не взмучивая осадка, 5 мл раствора переносят в другую мерную колбу емкостью 100 мл и доводят тем же спиртом до метки. Измеряют оптическую плотность полученного раствора на спектрофотометре при длине волны 238 нм в кювете с толщиной слоя в 1 см. В контрольную кювету помещают спирт.
Содержание кортизона ацетата в граммах вычисляют по формуле:
где D-оптическая плотность испытуемого раствора;
- удельный показатель поглощения кортизона ацетата Е (1%, 1 см) при 238 нм;
а - навеска препарата в граммах;
б - средний вес таблетки в граммах.
Количественное определение по описанному выше методу подвергается постоянной критике. Основной причиной для этого является общеизвестный факт, что различные спектрофотометры (даже различные приборы одной и той же модели и одного производства) дают значительные отклонения по величине поглощения для одного и того же стандартного раствора.
Более правильным способом является сравнение поглощения испытуемого вещества с поглощением стандартного образца, определенного в тех же условиях. Таким образом достигается наибольшая точность, так как при этом учитываются многочисленные факторы, влияющие на спектрофотометрические измерения, как, например, установка длины волны, ширина щели, поглощение кюветы, поправки на поглощение растворителя и т. д.