Количественное определение спектометрией в ультрафиолетовом спектре

Если максимум поглощения лежит между 323 и 327 нм и отношение поглощения при 300 им к поглощению при 325 нм не превышает 0,73, получают исправленное поглощение по уравнению:

A325 (испр.) =6,815 А325 - 2,555 А310 - 4,260 А334.

Активность образца в Международных единицах в граммах рассчитывают по формуле:

Е325 (испр.) * 18300,

за исключением случая, когда исправленное поглощение лежит в пределах ±3,0% неисправленного поглощения, исправленным поглощением можно пренебречь, и активность рассчитывают по неисправленному поглощению.

Если максимум поглощения лежит вне области 323 до 327 им или отношение поглощения при 300 им к поглощению при 325 им превышает 0,73, неомыленную часть образца нужно подвергать хроматографированию.

При выполнении спектрофото метрического анализа витамина А следует принимать во внимание, что растворы ретинола исключительно чувствительны по отношению к свету.

В качестве растворителей применяются петролейный эфир, циклогексан, изопропиловый спирт и реже хлороформ. Чаще всего предпочитают циклогексан, так как спектральные различия в области 310 до 315 нм между нео- и транс-витамином А менее проявляются в этом растворителе. Растворители подвергают дополнительной очистке путем перегонки; рекомендуется также проверять их спектральную чистоту в области от 300 до 350 нм.

Согласно ГФХ, содержание ретинола определяют в индивидуальном веществе спектрофотометрически при 326 нм в растворе в абсолютном спирте. Предварительно проводят испытание на поглощающие примеси. Расчет производят принимая 1550 за величину Е (1%, 1 см) для 100% ретинола при длине волны 326 нм.

Фармакопея США XVII указывает, что при условиях определения (поглощение измеряют после омыления) следует ожидать расхождения в данных, полученных различными лабораториями при Р = 0,05 около ±8%.